产品信息

产品应用：抗体标记

标记基团：NHS-Biotin

产品特点

★ 快速：整个过程仅需 90 min。

★ 方便：本生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂；生物素已活化可直接使用；用超滤管离心脱盐和去除游离的生物素，无需透析等繁琐工序。

★ 使用灵活：既可用于微量标记又可大量标记，每支超滤管每次可标记0.1-1mg蛋白。

★ 脂溶性：本试剂盒内生物素为脂溶性，某些实验中，需要生物素标记的蛋白进入细胞膜内进行反应，此种标记方式相对比较有效。

保存条件：未拆封的试剂盒可在 2~8℃保存一年,溶解后的生物素可在-20℃或-80℃保存一周。

标记原理

在一定pH范围内，生物素专一地与伯氨基反应(N-末端及赖氨酸残基侧链)形成稳定的酰胺键，从而实现与蛋白的偶联。结合生物素-亲和素系统，可广泛用于流式细胞术、荧光成像、蛋白质印迹和ELISA检测，以增加信号强度，获得更高的灵敏度。

标记流程

操作过程

·实验前准备

1. 仔细阅读标记试剂盒的使用说明书。

2. 待标记抗体中不得含有BSA等其它蛋白；叠氮钠、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物会在操作的步骤1中去除。

2. 按照生物素标记使用量的计算的公式计算所需要的生物素的量。

3. 提前20min从冰箱中取出试剂盒，使试剂盒各组分平衡至室温。。

4. 超滤管浸润：向干燥的超滤管滤芯中加入500μL标记缓冲液，室温放置10 min备用，在加入待标记物之前弃去标记缓冲液即可（整个标记过程中超滤管滤芯都应该保持湿润）。

标记步骤（本操作步骤按照1mg抗体的量进行标记）

1. 取1mg待标记抗体于超滤管中，并加入不超过超滤管体积的标记缓冲液，12,000g 离心3min；可以重复此步骤3次；超滤完成，加入0.5mL标记缓冲液调整抗体的浓度到2mg/mL左右。

2. 加入13.3μL的10 mM生物素至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育 30min。

3. 12,000 x g 离心 10min。

4. 加入适量1×PBS至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀，12,000g 离心3min，重复此步骤3次。

5. 收集超滤管中的溶液（即生物素标记的抗体），加 0.2 mL 1×PBS 至超滤管中，轻轻吹打。将超滤管倒置于另一个收集管中，8000×g 离心5min。收集管中得到的溶液，即为生物素标记的抗体。纯化后的标记抗体可采用 A280 或 BCA 法测定蛋白浓度。

注意事项 

本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究