试剂盒介绍

EnkiLife Fluor405荧光素标记试剂盒包含标记抗体蛋白的多个组分，如高性能的荧光染料，纯化用超滤离心管，标记缓冲液等，可轻松可靠地标记抗体、蛋白质。

EnkiLife小分子荧光染料标记试剂盒中所用的染料经过核心结构优化，荧光亮度更亮，和细胞或组织的非特异性结合降低，且荧光性质稳定，不易发生荧光漂白或荧光淬灭。标记的抗体或蛋白能够满足多种科研需求，如胞内靶标标记，动物/细胞荧光成像，多色免疫荧光，流式细胞术，WB，ELISA等。

本试剂盒优势：

快速：标记时间仅需约30分钟，同时兼顾标记效果和标记效率。

简便：每只染料试剂已经优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，固体染料形式批次稳定，按照步骤进行操作可得到较好效果。

灵活：大规格的试剂盒中提供的染料进行了分装，批次性能一致，方便多次标记使用。

标记效果突出：优化了的标记缓冲液，染料标记位点相对固定，增强了标记后抗体的同质性。

小分子荧光染料标记抗体原理

在一定pH范围内，荧光染料活化基团专一性与抗体蛋白上的伯氨基反应，形成稳定的酰胺键，从而实现与抗体蛋白的偶联。

操作过程                                     

实验前准备                                   

1. 仔细阅读使用说明书。

2. 提前20 分钟从冰箱中取出试剂盒，使试剂盒各组分平衡至室温。（注：不需要用到的试剂组分继续放置在冰箱中）。

3. 超滤管浸润：向干燥的超滤管滤芯中加入500 μL标记缓冲液，室温放置10 分钟备用，在加入待标记物之前弃去标记缓冲液即可（整个标记过程中超滤管滤芯都应该保持湿润）。

4. 溶解Fluor405：每只标记20μg抗体的染料用1μL DMF溶解，每只标记200μg抗体的染料用10μL DMF溶解，涡旋混匀或移液器吸打使其完全溶解，备用。

5. 抗体准备：请确保抗体样本符合下表标准

标记步骤（适用于标记20μg~40μg抗体）

1. 抗体样本超滤浓缩换液步骤： 取20μg~40μg待标记抗体于超滤管滤芯中，并加入不超过超滤管滤芯最大体积的标记缓冲液，14000 × g 离心3~5 分钟，弃去滤液；可以重复此步骤3次，最后一次超滤完成得到20~30μL，将超滤管滤芯倒置于收集管中，14000 × g 离心1 分钟，收集得到20~30μL抗体溶液。将滤芯中补加适量1×PBS，保持湿润。

2. 将溶解后的Fluor405  1μL全部加至上述20~30μL抗体溶液中，并轻轻吹打混匀。密封盖好盖子，放入37 ℃恒温箱中避光温育 30 分钟。

3. 弃去滤芯中缓冲液，将标记混合物再转入滤芯中，补足1×PBS至500μL，14000 × g 离心3~5 分钟，弃去滤液，重复此步骤3~5次至收集管中滤液几乎透明。

4. 将超滤管滤芯倒置于另一个收集管中，14000 × g 离心1分钟。收集管中得到的溶液，即为Fluor405标记的抗体。（注：如需进行标记效果的DOL计算评估，请参阅附录说明，且在加入标记蛋白保存液之前进行）。

5. （可选）向标记后的抗体中加入适量标记蛋白保存液，4℃保存或分装后-20 °C保存（也可不加蛋白保存液使用低吸附管子分装后-20 °C保存），避免反复冻融，可稳定保存6个月以上。

注意事项

1. 本标记试剂盒设计是针对抗体(150 KD)的标记，如需要标记其他蛋白，请联系我们针对性选择相关试剂耗材或开展标记技术服务。

2. 染料易受潮水解失效，实验前将其移至室温平衡后再开封。

3. 本试剂盒中设计的染料用量和抗体用量相对固定，是基于标记多种抗体得出的经验比例，能保证得到较好效果。某些抗体或蛋白可能因特殊结构或定量差别较大，用户可根据实际情况选择合适规格的试剂盒增减染料用量进行标记比例优化。

具体操作以说明书为准！