试剂盒介绍

EnkiLife Fluor700荧光素标记试剂盒中所用的染料经过核心结构优化，荧光亮度更亮，和细胞或组织的非特异性结合降低，且荧光性质稳定，不易发生荧光漂白或荧光淬灭。标记的抗体或蛋白能够满足多种科研需求，如胞内靶标标记，动物/细胞荧光成像，多色免疫荧光，流式细胞术，WB，ELISA等。

本试剂盒优势：

快速：标记时间仅需约30分钟，同时兼顾标记效果和标记效率。

简便：每只染料试剂已经优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，固体染料形式批次稳定，按照步骤进行操作可得到较好效果。

灵活：大规格的试剂盒中提供的染料进行了分装，批次性能一致，方便多次标记使用。

标记效果突出：优化了的标记缓冲液，染料标记位点相对固定，增强了标记后抗体的同质性。

小分子荧光染料标记抗体原理

在一定pH范围内，荧光染料活化基团专一性与抗体蛋白上的伯氨基反应，形成稳定的酰胺键，从而实现与抗体蛋白的偶联。

标记步骤（适用于标记20μg~40μg抗体）

1. 抗体样本超滤浓缩换液步骤： 取20μg~40μg待标记抗体于超滤管滤芯中，并加入不超过超滤管滤芯最大体积的标记缓冲液，14000 × g 离心3~5 分钟，弃去滤液；可以重复此步骤3次，最后一次超滤完成得到20~30μL，将超滤管滤芯倒置于收集管中，14000 × g 离心1 分钟，收集得到20~30μL抗体溶液。将滤芯中补加适量1×PBS，保持湿润。

2. 将溶解后的Fluor700  1μL全部加至上述20~30μL抗体溶液中，并轻轻吹打混匀。密封盖好盖子，放入37 ℃恒温箱中避光温育 30 分钟。

3. 弃去滤芯中缓冲液，将标记混合物再转入滤芯中，补足1×PBS至500μL，14000 × g 离心3~5 分钟，弃去滤液，重复此步骤3~5次至收集管中滤液几乎透明。

4. 将超滤管滤芯倒置于另一个收集管中，14000 × g 离心1分钟。收集管中得到的溶液，即为Fluor680标记的抗体。（注：如需进行标记效果的DOL计算评估，请参阅附录说明，且在加入标记蛋白保存液之前进行）。

5. （可选）向标记后的抗体中加入适量标记蛋白保存液，4℃保存或分装后-20 °C保存（也可不加蛋白保存液使用低吸附管子分装后-20 °C保存），避免反复冻融，可稳定保存6个月以上。