产品介绍

PE-Cy5是一种串联荧光染料，由R-PE和Cy5结合而成，其主要吸收峰在565nm，最大发射峰在668nm左右，具有较大的斯托克斯位移，使其主要用于多色流式细胞术。

此染料的关键特点

1. 大斯托克斯位移： 这是串联染料最大的优势。激发波长（565 nm）和发射波长（~668 nm）之间有很大的差距（>100 nm）。这大大减少了激发光和发射光之间的光谱重叠，降低了背景噪音和补偿需求。

2. 利用强吸收供体： PE 是一种大型藻胆蛋白，具有非常高的 摩尔吸光系数，这意味着它能非常有效地捕获激发光光子，产生很强的初始信号。

3. 发射在远红光区： Cy5 的发射位于远红光区域（~668 nm）。这个波长范围在流式细胞仪中通常对应 APC 通道（或类似名称的通道，如 PerCP-Cy5-5 通道也可能检测到，但最佳是 APC 通道）。这个区域背景自发荧光通常较低（细胞成分自身荧光较弱），信噪比好。

4. 多色流式细胞术的关键： PE-Cy5 的发射光谱与常用的荧光染料如 FITC (绿色)、PE (黄色)、APC (远红)、PerCP (深红) 等有良好的区分度。这使得它成为设计复杂多色（>4 色）流式细胞术实验方案中极其常用和重要的染料之一，用于同时检测多个细胞表面或胞内标记物。

5. 仪器兼容性： 绝大多数配备蓝色（488 nm）或绿光（532 nm/561 nm）激光器的流式细胞仪都设有检测 Cy5/APC 范围荧光的通道（通常使用 ~660/20 nm 或 ~670/14 nm 等滤光片）。

产品优势：

l 活化染料具备加长臂: 特殊设计的加长柔性臂，有效避免抗体和荧光染料间的空间位阻，保护抗体活性同时，获得更高标记效率。

l 定向偶联: 优化的定向偶联技术，标记抗体的均一性较好，且提高标记效率。

l 快速：步骤简单，最快3~4h即可完成高效标记。

l 染料高亮度：优选的高性能荧光染料，量子产率高，荧光亮度大，检测灵敏度高。

l 操作简便：每只染料试剂已经优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，抗体样本符合标记条件情况下无需超滤，固体染料形式批次稳定，按照步骤混合相应试剂，进行简单操作可得到较好效果。

l 灵活：大规格的试剂盒中提供的染料进行了分装，批次性能一致，方便多次标记使用。

l 实验试剂全覆盖：配备标记保存液，从标记到保存全流程无需额外配备试剂，一个盒子搞定全部标记过程，省心，省事。

试剂盒规格

标记原理

标记步骤（适用于标记20μg~40μg抗体）

1. 抗体样本超滤浓缩换液：取待标记抗体如20μg（纯度>90%），于超滤管滤芯中，并加入不超过超滤管滤芯最大体积的标记缓冲液，14000 × g 离心5 分钟，弃去滤液；根据抗体中含有添加物情况可以重复此步骤1次，最后一次超滤完成得到20~30μL，将超滤管滤芯倒置于收集管中，14000 × g 离心1 分钟，收集得到的抗体溶液，根据抗体总量适当补足标记缓冲液至抗体浓度为1mg/ml。同时再将滤芯中补加适量1×PBS，保持湿润。

注：若待标记的抗体浓度大于2mg/mL，且不含杂质成分时（如抗体缓冲液为PBS），直接使用标记缓冲液稀释抗体至1mg/mL；

2. 抗体活化：按照20μg抗体加入0.5μL 抗体活化试剂的比例对抗体进行活化， 轻轻混匀后37℃反应60分钟。

3. 染料和抗体偶联：将1管活化的染料（每管标记20μg~40μg抗体）加入10μL标记缓冲液，移液器吸打或者涡旋混匀溶解后直接加入至修饰后的抗体溶液中，37℃避光反应1.5h或4℃避光过夜反应。

4. 封闭保存：在300μg 封闭试剂管中加入30μL DMSO 混匀溶解，后按照20μg抗体加0.6μL 封闭试剂，混匀后37℃避光反应30分钟，封闭未反应完的活性基团。此时反应完成，根据后续应用需求选择性添加抗体保存液至合适浓度（一般要求抗体浓度不小于0.2mg/mL，4℃避光保存，请勿冻存，一般可稳定保存半年以上。