染料特点：

PE-F680是一种串联荧光染料，由R-PE和Fluor680结合而成。其核心原理是荧光共振能量转移（FRET）：PE作为供体分子吸收激发光（约565 nm），将能量传递给受体分子F680，最终由F680发射更长波长的荧光（约700 nm）。PE的高消光系数结合AF680的亮度和光稳定性，信号强度远超单一染料。

PE-F680和PE-Cy5.5染料类似，具有较大的斯托克斯位移，可替代使用，Fluor680染料替换Cy5.5后标记一些抗体可降低和某些细胞的非特异性结合，改善应用效果，主要用于多色流式细胞术，免疫荧光等。

本试剂盒优势：

l 活化染料具备加长臂: 特殊设计的加长柔性臂，有效避免抗体和荧光染料间的空间位阻，保护抗体活性同时，获得更高标记效率。

l 定向偶联: 优化的定向偶联技术，标记抗体的均一性较好，且提高标记效率。

l 快速：步骤简单，最快3~4h即可完成高效标记。

l 染料高亮度：优选的高性能荧光染料，量子产率高，荧光亮度大，检测灵敏度高。

l 操作简便：每只染料试剂已经优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，抗体样本符合标记条件情况下无需超滤，固体染料形式批次稳定，按照步骤混合相应试剂，进行简单操作可得到较好效果。

l 实验试剂全覆盖：配备标记保存液，从标记到保存全流程无需额外配备试剂，一个盒子搞定全部标记过程，省心，省事。

试剂盒规格

标记原理

主要应用场景

• 多色流式细胞术：如免疫细胞分型（如CD4/CD8检测），尤其适用于光谱流式细胞仪的多通道同步分析。

• 免疫荧光显微成像：与抗体偶联后用于组织或细胞的多靶标标记，提升共定位研究精度。

• 活体成像：近红外发射光（680 nm）穿透组织能力强，适用于小动物cancer模型或药物分布追踪。

标记步骤（适用于标记20μg~40μg抗体）

1. 抗体样本超滤浓缩换液：取待标记抗体如20μg（纯度>90%），于超滤管滤芯中，并加入不超过超滤管滤芯最大体积的标记缓冲液，14000 × g 离心5 分钟，弃去滤液；根据抗体中含有添加物情况可以重复此步骤1次，最后一次超滤完成得到20~30μL，将超滤管滤芯倒置于收集管中，14000 × g 离心1 分钟，收集得到的抗体溶液，根据抗体总量适当补足标记缓冲液至抗体浓度为1mg/ml。同时再将滤芯中补加适量1×PBS，保持湿润。

注：若待标记的抗体浓度大于2mg/mL，且不含杂质成分时（如抗体缓冲液为PBS），直接使用标记缓冲液稀释抗体至1mg/mL；

2. 抗体活化：按照20μg抗体加入0.5μL 抗体活化试剂的比例对抗体进行活化， 轻轻混匀后37℃反应60分钟。

3. 染料和抗体偶联：将1管活化的染料（每管标记20μg~40μg抗体）加入10μL标记缓冲液，移液器吸打或者涡旋混匀溶解后直接加入至修饰后的抗体溶液中，37℃避光反应1.5h或4℃避光过夜反应。

4. 封闭保存：在300μg 封闭试剂管中加入30μL DMSO 混匀溶解，后按照20μg抗体加0.6μL 封闭试剂，混匀后37℃避光反应30分钟，封闭未反应完的活性基团。此时反应完成，根据后续应用需求选择性添加抗体保存液至合适浓度（一般要求抗体浓度不小于0.2mg/mL，4℃避光保存，请勿冻存，一般可稳定保存半年以上。