产品介绍

Mitochondrial Tracker (Red)是一种红色荧光染料,含有氯甲基官能团,可标记线粒体。Mitochondrial Tracker (Red)只需与活细胞简单孵育即可被动运输穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上,该染料的积累取决于膜电位的高低。一旦线粒体被染色后,还可根据后续实验的需求用醛类固定剂进行固定。对于免疫组化及原位杂交实验,细胞需先经过透化,Mitochondrial Tracker (Red)还可染色透化细胞的线粒体。该染料适合双标记实验,其红色荧光与其他的绿色荧光探针可以很好的区分开来。虽然传统的线粒体荧光探针如 TMR 和罗丹明 123,也可以很容易的聚集在功能线粒体上,但是一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉,从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量状态影响因子的实验中,使其应用大受限制。

基本信息

Mitochondrial Tracker (Red)激发/发射波长:579/599nm

试剂制备

储存液的制备

用高纯度的无水DMSO溶解,配置成浓度为1 mM的储液。该染料分子量为 531.5 g/mol,计算下来,50 μg粉末只需加入94 μL DMSO即可得到1 mM储存液。

注:①在打开试剂管前,需将本品回温至室温。

②可根据单次的使用量将储存液分装成小管,放到-20℃避光保存,避免反复冻融。

工作液的配制

根据不同的细胞及实验要求,使用的染料浓度有所不同,以下的操作条件仅作参考,可根据细胞类型和其他的相关因素如细胞或组织的透化等进行适当调整。

用适当的缓冲液(如PBS)或者细胞培养基稀释1 mM储液至工作液浓度。一般推荐使用浓度为25-500 nM。对于后续需要做固定或透化的样本,推荐工作浓度为100-500 nM,为了降低过度加载导致的潜在伪影和线粒体毒性,在不影响实验结果的前提下应尽可能降低染色液浓度。另外,浓度过高也可能对其他细胞结构进行染色。

注:由于培养基中的氧化酶会减弱染料的作用,本操作中不建议使用完全培养基对储液进行稀释。

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2. 为避免反复冻融,可对本产品进行小量分装。

备注:该试剂仅供科研使用!