人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞 NK-92

NK-92细胞是一种源自人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞株，最初是从一位50岁白人男性患者的外周血单核细胞中分离出来的。这种细胞株依赖于白细胞介素-2（IL-2）来维持其增殖和功能，缺乏IL-2时会在72小时内死亡。NK-92细胞具有对多种恶性细胞的细胞毒性，尤其在铬释放试验中展示出对K562和Daudi细胞的杀伤能力。

NK-92细胞表面标记包括CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54阳性，而CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR阴性。这些细胞呈悬浮生长，倍增时间约为40-50小时，并且易于培养和扩增。

NK-92细胞广泛应用于癌症、免疫学和毒理学研究，并且是首个获得FDA批准进行临床试验的NK细胞系。然而，由于NK-92细胞源自恶性非霍奇金淋巴瘤患者，存在潜在的二次肿瘤风险和EB病毒易感性，因此在临床应用前通常需要进行辐射处理以确保其安全性[1,2]。此外，NK-92细胞还被基因工程改造，如CAR-NK-92细胞，以增强其抗肿瘤活性[5,7]。

总之，NK-92细胞因其独特的来源和特性，在癌症治疗中具有重要的应用潜力，但同时也面临一些挑战和限制。

NK-92细胞在治疗人恶性非霍奇金淋巴瘤中的临床试验结果是什么？

NK-92细胞在治疗人恶性非霍奇金淋巴瘤中的临床试验结果显示出一定的潜力，但效果有限。NK-92细胞是从一名患有侵袭性非霍奇金淋巴瘤的患者外周血单核细胞中分离出来的，具有强大的细胞毒性，并且可以通过辐射照射来防止其恶性增殖[9]。

多项I期临床试验已经研究了照射后的NK-92细胞输注对多种血液恶性肿瘤患者的疗效。尽管这些治疗相关的毒性较少，但其效果有限，可能与持久性不足有关[11]。此外，NK-92细胞在体内扩增和持久性方面存在限制，因为它们源自NK细胞肿瘤，需要经过辐射处理以防止恶性增殖[11]。

在一项研究中，NK-92细胞被用于治疗晚期癌症患者，显示出轻微的不良反应和显著的效果[3]。然而，另一项研究指出，NK-92细胞治疗并未显著延长生存期[8]。

此外，为了克服NK-92细胞的限制，研究人员尝试通过工程化改造来增强其功能。例如，通过内源性表达IL-2和高亲和力CD16受体，开发了高亲和力NK细胞（haNKs），这些细胞在多种实体瘤中得到了探索，但在淋巴瘤的QUILT 3.061研究中目前暂停[11]。

NK-92细胞的辐射处理过程及其对细胞功能的影响有哪些详细信息？

NK-92细胞是一种来源于淋巴瘤患者的自然杀伤（NK）细胞系，因其对肿瘤细胞的高细胞毒性活性和“现成”可用性，被广泛用于癌症免疫疗法中。然而，由于NK-92细胞本身具有恶性起源，因此在临床应用前需要进行辐射处理以抑制其增殖并防止潜在的肿瘤发生。

辐射处理过程

NK-92细胞通常使用伽马射线进行辐射处理。实验中，NK-92细胞在特定培养基中培养后，接受不同剂量的伽马射线辐射，剂量范围从2.5 Gy到20 Gy不等[10]。例如，在一项研究中，NK-92细胞被置于含有15 ml培养基的容器中，并使用铯-137源进行辐射处理[10]。辐射剂量的选择依据临床治疗条件模拟，常见的剂量为10 Gy[14]。

辐射对细胞功能的影响

细胞存活率和细胞毒性功能

辐射处理显著影响NK-92细胞的存活率和细胞毒性功能。研究表明，随着辐射剂量的增加，NK-92细胞的存活率逐渐下降，同时其细胞毒性功能也显著降低。例如，在10 Gy辐射处理后，NK-92细胞的存活率明显下降，且其连续杀伤能力减少了超过三分之二[10]。具体来说，未辐射的NK-92细胞对目标的杀伤率为5.6（KF 5.6），而10 Gy辐射处理后的NK-92效应细胞对目标的杀伤率仅为1.5（KF 1.5）[10]。

Fas受体激活的影响

Fas（CD95）受体的激活在辐射后的NK-92细胞中起到了重要作用。尽管NK-92细胞对Fas配体激活不敏感，但抗Fas治疗确实影响了非坏死性辐射后的NK-92细胞，表现为细胞缩小[10]。此外，辐射增加了NK-92细胞对Fas配体激活的敏感性，导致其连续杀伤能力显著下降[10]。

免疫系统攻击的易感性

辐射处理后的NK-92细胞更容易受到患者免疫系统的攻击。研究表明，辐射后的NK-92细胞更易被未刺激和IL-2激活的淋巴因子激活杀伤细胞（LAK）攻击[10]。相比之下，未辐射的NK-92细胞则更抗御这些攻击[10]。

DNA损伤和基因表达变化

辐射处理导致大量DNA损伤，并使照射细胞在G2/M细胞周期阶段积累。转录组分析显示，与低能量电子辐射（LEEI）相比，伽马辐射后两小时约有12倍更多的基因表达差异[14]。表面分子分析表明，照射后CD56表面表达下降，但激活受体NKp46、NKG2D或NKp30的水平没有变化[14]。

结论

总体而言，NK-92细胞在辐射处理后其存活率和细胞毒性功能显著下降，且更容易受到免疫系统的攻击。这些变化限制了其在体内治疗中的有效性。

CAR-NK-92细胞与传统NK-92细胞在抗肿瘤活性上的比较研究结果是什么？

CAR-NK-92细胞相较于传统NK-92细胞在抗肿瘤活性上表现出显著的优势。具体来说：

1. 抗肿瘤效果：研究表明，CAR-NK-92细胞在体内对淋巴瘤细胞具有更优的抗肿瘤活性，尤其是在携带IL-15/IL-15Ra的CD19-CAR NK细胞中，其在体内对淋巴瘤细胞的抑制效果显著优于传统NK-92细胞[17]。此外，针对乳腺癌细胞的研究也显示，CAR修饰的NK细胞对CD19阳性乳腺癌细胞展现出显著的细胞毒性作用，并且能够有效激活并分泌多种细胞因子，进一步增强了其抗肿瘤能力[18]。
2. 持久性与稳定性：在某些情况下，CAR-NK-92细胞表现出更好的持久性和稳定性。例如，在前列腺癌模型中，经过辐照处理的双CAR NK-92细胞在对抗肿瘤细胞时表现出与未辐照对照组相当甚至更优的杀伤能力[16]。这表明CAR-NK-92细胞在体内维持其功能的能力更强。
3. 广泛的应用潜力：CAR-NK-92细胞不仅在血液恶性肿瘤中表现出色，还在实体瘤治疗中展现出巨大潜力。例如，EGFRvIII特异性CAR构建的NK细胞线YTS在胶质母细胞瘤（GB）模型中展现出显著的抗肿瘤活性，并且通过设计和生产包含EGFRvIII特异性抗体MR1-1和DAP12的CAR结构，提高了肿瘤检测和归巢能力，增强了肿瘤抑制效果[21]。
4. 临床应用前景：CAR-NK-92细胞相较于CAR-T细胞具有显著优势，如高细胞毒性、快速生产大量细胞、避免部分靶向副作用等，为CAR-T细胞疗法的局限性提供了替代方案[7]。此外，CAR-NK-92细胞在临床试验中也显示出较少的严重细胞因子释放综合征或神经毒性，低风险的移植物抗宿主病和异基因NK细胞输注的安全性[20]。

NK-92细胞在免疫逃逸机制中的作用及其潜在的治疗策略有哪些？

NK-92细胞在免疫逃逸机制中的作用及其潜在的治疗策略可以从多个角度进行探讨。

NK-92细胞在免疫逃逸中的作用

肿瘤微环境（TME）中的多种成分通过不同机制调节NKG2D受体和NKG2DL配体的表达，从而影响NK细胞的功能。偏离正常值的NKG2D受体/NKG2DL比值可促进肿瘤从NK细胞介导的免疫监控中逃脱[26]。此外，TGFβ信号通路的激活也会抑制NK细胞的功能，导致其在肿瘤微环境中失去活性[28]。

癌症细胞可以通过抗原丢失或抗原不可达性来逃避NK细胞的攻击。例如，PD-L1和ERBB2的表达下调可能导致NK细胞无法有效识别和杀伤肿瘤细胞[27]。ICAM-1的下调也是肿瘤细胞逃避免疫监视的一种方式，而CAR-NK细胞可以通过靶向这些抗原来克服这一障碍[25]。

肿瘤微环境中存在多种免疫抑制因子，如TGFβ、IL-10等，这些因子可以抑制NK细胞的活性和代谢，使其无法有效地对抗肿瘤[28]。

潜在的治疗策略

通过基因工程改造NK-92细胞，使其表达嵌合抗原受体（CAR），可以显著提高其对肿瘤细胞的特异性杀伤能力。例如，双特异性CAR-NK细胞可以同时靶向多个抗原，从而降低抗原逃逸的概率[16]。此外，针对PD-L1和ERBB2的双靶向CAR-NK细胞能够克服单一靶点丢失导致的免疫逃逸[27]。

Thea-Cot-NK92系统通过偶联剂调节其杀伤能力，无需对NK细胞进行遗传改造，即可在体外实验和体内模型中裂解癌症细胞。这种方法适用于多种抗原，节省了CAR重新工程所需的成本和时间[24]。

研究表明，通过改造TGFβR2信号通路，使NK-92细胞对TGFβ不敏感，可以增强其抗肿瘤特性[28]。此外，通过增强NK细胞的代谢和功能，如使用TGFβ信号抑制剂，可以提高治疗效果[28]。

NK细胞疗法可以与其他免疫治疗策略（如CAR-T、CAR-NK和抗PD-1/PD-L1靶向）以及化疗、放疗和肿瘤病毒治疗策略相结合，以实现更全面的肿瘤消除[26]。

结论

NK-92细胞在免疫逃逸机制中扮演了重要角色，主要通过肿瘤微环境中的免疫抑制因子、抗原丢失和抗原不可达性等方式实现。针对这些机制的治疗策略包括CAR-NK细胞疗法、偶联剂介导的NK细胞疗法、代谢和信号通路的调控以及联合疗法等。

NK-92细胞治疗的安全性和副作用管理策略有哪些？

NK-92细胞治疗的安全性和副作用管理策略主要包括以下几个方面：

1. 辐射处理：NK-92细胞在临床应用前需要经过辐射处理，以减少其潜在的肿瘤形成性和EB病毒（EBV）感染的风险。然而，这种辐射处理会限制NK-92细胞在体内的增殖和持久性，可能影响其长期抗肿瘤效果[30]。
2. 临床试验中的安全性：多项临床试验表明，经过辐射处理的NK-92细胞在治疗晚期癌症患者时具有良好的安全性和耐受性。例如，在一项针对肾癌和肺癌患者的试验中，未观察到严重的不良反应，仅有一名患者出现3级发热和一名患者出现4级低血糖事件[34]。此外，一项针对急性髓系白血病患者的I期临床试验也未报告任何3-4级不良事件[33]。
3. 预防性药物治疗：在NK-92细胞输注前，通常会使用预防性药物来管理潜在的副作用。例如，在某些研究中，患者在NK-92细胞输注前2小时开始服用特定药物，并在接下来的5天内每天口服Allopurinol以预防细胞因子释放综合征[12]。此外，还会使用皮质类固醇（如Prednisone）和抗组胺药（如Clemastin）进行预防性治疗[12]。
4. 淋巴去势化疗：为了提高NK-92细胞的持久性，一些研究建议在NK-92细胞输注前进行淋巴去势化疗。这可以通过优先去除受者体内的淋巴细胞来克服免疫系统对NK细胞的排斥反应[33]。
5. 细胞因子支持：IL-2和IL-15等细胞因子常用于支持NK细胞的存活和扩张。然而，IL-2的使用可能会引发不适、恶心和呕吐等副作用，而IL-15则可能增加免疫疲劳和细胞因子相关毒性[33]。
6. 剂量管理：在临床试验中，NK-92细胞的剂量通常根据患者的具体情况调整。例如，在一项I/II期研究中，患者接受了不同剂量的NK-92细胞治疗，并根据第一次输注的结果决定是否进行第二次输注[12]。

总之，NK-92细胞治疗的安全性和副作用管理策略涉及辐射处理、预防性药物治疗、淋巴去势化疗、细胞因子支持以及严格的剂量管理等多个方面。

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