听说蛋白上样缓冲液可以无毒低粘稠，不再为WB实验发愁？？
发表时间：2025-12-19还原型上样缓冲液是 Western Blot（WB）蛋白样品处理的核心试剂，作用是使蛋白变性、解聚并带上均匀电荷，保证电泳时蛋白按分子量大小分离，同时避免蛋白高级结构对抗体识别的干扰。
蛋白上样缓冲液绝不是简单的“让样品沉底”，而是决定电泳成败的“蛋白驯化师”，所以选对低粘稠的蛋白上样缓冲液，让你蛋白定量的精准度更上一层楼，让你内参不齐的烦恼都走开，让你不再为WB实验发愁！
一、核心成分及作用
还原型上样缓冲液的关键特征是添加了还原剂，常用配方（以 5×Loading Buffer 为例）及成分功能如下：
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成分 |
浓度（5×） |
核心作用 |
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Tris-HCl（pH 6.8） |
0.25 mol/L |
维持缓冲体系 pH 稳定，防止蛋白在加热变性过程中酸碱性失衡 |
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SDS |
10%（w/v） |
阴离子去污剂，使蛋白变性、解聚，包裹蛋白形成负电荷包裹层，消除蛋白自身电荷差异 |
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甘油 |
50%（v/v） |
增加样品密度，使样品沉入加样孔底部，避免漂浮扩散 |
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溴酚蓝 |
0.5%（w/v） |
电泳前沿指示剂，直观观察电泳进程 |
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还原剂 |
- |
断裂蛋白分子内 / 分子间的二硫键，彻底解聚蛋白亚基 |
还原剂的种类与区别
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还原剂 |
浓度（5×） |
优点 |
缺点 |
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β- 巯基乙醇 |
5%（v/v） |
还原能力强、成本低，常规 WB 首选 |
有刺激性气味，易挥发氧化，需现用现加 |
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DTT（二硫苏糖醇） |
100 mmol/L |
无异味、稳定性高，还原效率略优于 β- 巯基乙醇 |
价格较高，高浓度可能影响部分蛋白电泳迁移率 |
EnkiLife(恩玑生命）基于传统蛋白上样缓冲液粘稠度高，蛋白制样取样时残留严重，以及较重刺激性气味的局限性，采用新型还原剂配方，不含β-巯基乙醇和DTT，全新推出无毒低粘稠的5*蛋白上样缓冲液（RA10055）。（注：本品含变性剂和还原剂，不适用于蛋白的非变性电泳和变性非还原电泳。）
二、EnkiLife(恩玑生命）5*蛋白上样缓冲液（RA10055）使用方法
1. 样品与缓冲液混合：按蛋白样品：还原型上样缓冲液 = 4:1 的比例混合（如 40 μL 样品 + 10 μL 5× 上样缓冲液）。
2. 加热变性：将混合液置于95–100℃金属浴 / 沸水浴中加热 10 min，使蛋白彻底变性解聚。
3. 样本冷却，离心处理：12000 rpm 离心 1 min，使样品中可能存在的沉淀聚集在管底，取上清上样电泳。
三、还原型 vs 非还原型上样缓冲液（关键区别）
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特性 |
还原型上样缓冲液 |
非还原型上样缓冲液 |
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还原剂 |
含 β- 巯基乙醇 / DTT或新型还原剂配方（不含β-巯基乙醇和 DTT） |
不含还原剂 |
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蛋白状态 |
二硫键断裂，蛋白完全解聚为单体 |
二硫键保留，蛋白可能以多聚体形式存在 |
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电泳条带 |
对应蛋白单体分子量 |
可能出现单体、二聚体、多聚体多条带 |
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适用场景 |
常规 Western Blot（WB）定量、蛋白分子量鉴定 |
抗体识别构象表位、蛋白多聚体分析 |
四、注意事项
1. 传统蛋白上样缓冲液中的还原剂具有时效性：β- 巯基乙醇易氧化失效，建议分装保存并在使用前新鲜添加；DTT 溶液可分装后 - 20 ℃冻存，避免反复冻融。
2. 样品处理禁忌：还原条件下，不能用于检测依赖二硫键的构象型抗体，否则会导致抗体无法识别靶蛋白。
3. 浓度适配性：若蛋白样品浓度过高，可适当稀释缓冲液比例，避免 SDS 浓度过高影响电泳效果。
4. 保存条件：未添加还原剂的缓冲液可室温保存；含还原剂的缓冲液建议 4 ℃短期保存（1 周内），长期需 - 20 ℃分装冻存。
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