抗体稀释进入“无封闭时代”，你的WB试剂该换代了

抗体稀释液（Antibody Diluent）是免疫学实验中不可或缺的“介质”。它不仅用于将高浓度的一抗或二抗稀释至工作浓度，更是维持抗体活性、减少非特异性结合的关键缓冲体系。

一、抗体稀释液里到底放了什么？

抗体稀释液的核心是缓冲体系 + 蛋白保护剂 + 封闭剂 + 防腐剂，不同实验类型的配方会略有差异。

二、核心功能

1. 浓度调节:商品化抗体通常以高浓度母液（如 1mg/mL）提供，需用稀释液稀释至纳克级或微克级的工作浓度（如 WB 一抗常用 1:1000–1:5000，IHC 一抗常用 1:200–1:500），适配不同实验体系的灵敏度需求。

2. 维持抗体活性:提供稳定的 pH、离子强度和保护成分，防止抗体蛋白变性、聚集，确保抗原抗体特异性结合效率。

3. 降低非特异性背景:通过添加封闭成分，减少抗体与样品中无关蛋白、固相载体的非特异性吸附，提升实验信噪比。

三、常见类型及适用场景

根据实验需求，抗体稀释液分为通用型和专用型，需针对性选择：

1. 通用型抗体稀释液

配方：PBS/TBS + 1% BSA + 0.05% Tween-20 + 防腐剂

适用场景：多数 WB、ELISA、IF 实验，兼容绝大多数一抗和未标记二抗，通用性强。

2. IHC 专用抗体稀释液

特点：含更高比例的载体蛋白（如 2%–5% BSA）和温和去污剂，部分添加抗淬灭成分或组织穿透增强剂；避免使用影响抗原修复的成分。

适用场景：免疫组化（石蜡切片 / 冰冻切片），减少抗体在组织中的非特异性吸附。

3. HRP 标记抗体专用稀释液

特点：不含叠氮钠（叠氮钠是 HRP 的强抑制剂），改用 ProClin? 300 等无毒性防腐剂。

适用场景：HRP 标记二抗的稀释，保证酶活性。

4. 脱脂奶粉稀释液

配方：PBS/TBS + 5% 脱脂奶粉 + 0.05% Tween-20

适用场景：在 Western Blot (WB) 实验中，最经典的封闭试剂，成本低、封闭效果好；缺点：含乳清蛋白和糖蛋白，可能与抗磷酸化抗体、抗糖蛋白抗体发生交叉反应，此类实验需改用 BSA 稀释液。

由此可见，常用的通用型抗体稀释液均有各自的局限性，而EnkiLife恩玑生命通过深度优化的配方，推出免封闭快速抗体稀释液（Cat#:RA10056），让你的Western Blot (WB) 实验封闭少一步，孵育快一步：

• 高效省时：室温下20min快速完成一抗及二抗的孵育；

• 通用性：通用一抗和二抗，兼容磷酸化、乙酰化等修饰性抗体；

• 免封闭：首次使用本品稀释一抗时无需封闭；

• 可回收：本品稀释后的抗体可回收使用3-5次；

• 安全性：不含叠氮钠等有毒防腐剂，使用更安全。

与传统方法的时间对比

四、使用与保存注意事项

1. 稀释比例确定

参考抗体说明书推荐的工作浓度，结合实验体系（如样品抗原丰度、检测方法灵敏度）优化；可通过梯度稀释实验（如 1:500、1:1000、1:2000）确定最佳比例。

2. 配制与保存

商品化抗体稀释液：开封后 4℃冷藏保存，避免反复冻融；保质期通常为 6–12 个月。

自制稀释液：现配现用最佳；若需保存，4℃冷藏不超过 1 周，-20℃分装保存不超过 1 个月（含 BSA 的稀释液反复冻融会导致蛋白变性）。

3. 避免污染

稀释抗体时使用无菌移液器和管具，操作后密封保存；若发现稀释液浑浊、出现沉淀，需立即丢弃。

4. 特殊抗体适配

磷酸化抗体：禁用脱脂奶粉稀释液，需用EnkiLife恩玑生命免封闭快速抗体稀释液（Cat#:RA10056）或 BSA 稀释液，防止奶粉中磷酸酶降解抗原磷酸化位点。

荧光标记抗体：稀释液需避光保存，避免荧光淬灭；部分需添加抗淬灭剂。

五、常见问题及解决方案

EnkiLIfe(恩玑生命)Western Blot实验全流程与产品解决方案：