转膜液（蛋白免疫印迹 WB 专用）详解｜配方 / 类型 / 使用 / 避坑全攻略

      实验党速看！WB转印总翻车？条带模糊、漏转、大分子转不出来…90%是转膜液没选对！

      转膜液是 Western Blot蛋白转印步骤核心缓冲液，作用是将蛋白从凝胶转移至 NC膜 / PVDF 膜时提供导电环境、维持 pH 稳定，同时减少蛋白吸附、保证转印效率，直接决定 WB 条带清晰度与完整性。

一、主流配方类型（按成分 / 用途分，附优缺点 + 适用场景，精准匹配你的实验需求）

1. 经典湿转液（最常用，Tris - 甘氨酸体系）：基础配方（1L） Tris 3.03g + 甘氨酸 14.41g + 甲醇 200mL，加超纯水定容至 1L（pH≈8.3，无需调 pH）

? 优点

• 转印效率高，适配绝大多数常规蛋白（10kDa-200kDa）；

• 配方简单、成本低，稳定性强，室温可短期保存；

• 兼容 NC 膜 / PVDF 膜，条带清晰，背景低。

? 缺点

• 含甲醇，会使凝胶收缩、疏水蛋白变性，不利于大分子蛋白（＞200kDa）和疏水蛋白转印；

• 甲醇易挥发，长期放置浓度降低，需密封保存；

• 湿转耗时稍久，需冰浴降温防发热。

? 适用场景

• 常规 WB 实验、中小分子蛋白（10-200kDa）转印，实验室首选通用款。

2. 无甲醇转膜液（大分子 / 疏水蛋白专用）：去除甲醇，替换为20% 乙醇 / 5% SDS，其余保留 Tris - 甘氨酸基础体系

? 优点

• 避免甲醇导致的凝胶收缩，大幅提升大分子蛋白（＞200kDa，如肌动蛋白、抗体重链）转印效率；

• 减少疏水蛋白变性，保护蛋白抗原性，适合难转印蛋白；

• 无甲醇挥发刺激性气味，更环保，对实验人员更友好。

? 缺点

• 含 SDS 时易导致蛋白非特异性吸附，可能轻微升高背景；

• 乙醇保湿性强，凝胶易溶胀，转印时间需适当缩短；

• 对小分子蛋白（＜10kDa）转印效率略低，易漏转。

? 适用场景

• 大分子蛋白、疏水蛋白、膜蛋白转印，对甲醇敏感的蛋白实验。

3. 半干转专用转膜液：Tris - 甘氨酸体系基础上，提高离子浓度、降低甲醇比例（5-10%），部分添加 0.05% Tween-20

? 优点

• 适配半干转印仪，转印速度极快（5-30min），省时省力；

• 耗液量极少（仅需少量浸湿滤纸），成本更低；

• 产热少，无需冰浴，操作更便捷。

? 缺点

• 仅适配半干转印设备，湿转仪不可用；

• 对大分子蛋白转印效率略低于湿转液；

• 滤纸贴合不紧密时，易出现条带不均、漏转。

? 适用场景

• 快速转印、中小分子蛋白批量实验，半干转印仪专用。

4. 低分子量蛋白专用转膜液：降低 Tris - 甘氨酸浓度，甲醇比例提升至 25-30%，添加 0.01% SDS

? 优点

• 防止小分子蛋白（＜10kDa，如细胞因子、多肽）穿透膜孔流失，转印回收率≥90%；

• 条带锐利，无拖尾，背景极低。

? 缺点

• 甲醇浓度高，凝胶收缩明显，大分子蛋白几乎无法转印；

• 对 PVDF 膜损伤稍大，转印后需快速封闭。

? 适用场景

• 小分子蛋白（＜10kDa）WB 转印，精准捕获微量靶蛋白。

? 补充：转膜液选型核心原则

• 常规中小分子蛋白（10-200kDa）→ 经典甲醇湿转液（首选）；

• 大分子 / 膜蛋白 / 疏水蛋白→ 无甲醇转膜液；

• 快速批量实验→ 半干转专用液；

• 小分子蛋白（＜10kDa）→ 低分子量专用液；

• 对甲醇敏感 / 追求环保→ 无甲醇乙醇款。

? 划重点：转膜液选对=WB成功一半！按“蛋白分子量+转印设备”精准匹配，再避开上述坑，转印稳过不返工！

二、传统湿转必须依赖冰浴的原因

需冰浴的转膜液主要问题源于焦耳热效应。在电场作用下，电流通过液体时会产生热量。若不降温，转膜液电阻降低，导致过热，严重时会融化凝胶或导致蛋白扩散。

冰浴转膜液 =操作繁 + 易翻车 + 耗成本 + 伤蛋白 + 不友好，大分子转印难、新手易报废，批量实验直接劝退！

而EnkiLife恩玑生命新推出的20×免冰浴快速转膜液（Cat#: RA10051），Western Blot湿转法专用，●快速转膜●免冰浴设计●可重复使用●无需甲醇。

转膜参数：将电流设置为400mA，根据目的蛋白分子量参考下表设置转膜时间（1.0mm凝胶）：

三、故障速排

一句话带走

“25 mM Tris-192 mM Gly-0.05 % SDS-20 % 甲醇”是转膜液的“黄金配方”，4 ℃ 预冷、冰浴运行，90 % 蛋白 1 h 内一次转好；小肽降甲醇、大蛋白加 SDS、快速转用高盐低甲醇，按表索骥即可。

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