CY3（橙红色荧光）为什么能被Fluor555替代？？

Fluor555是一种橘黄色-橙红色荧光染料，是Cyanine3的类似物，常用于代替Cyanine3、TAMRA染料使用。Fluor555染料的极性很大，水溶性强，荧光亮度和荧光稳定性也极好，是蛋白/抗体标记的良好染料。从化学结构上看，Fluor555的母核是花菁素Cyanine3，但是母核上带有多达4个磺酸根基团，四磺酸结构让其具有极度亲水性，染料标记到蛋白表面后，不会改变蛋白表面极性，降低了蛋白疏水化聚集沉淀的风险，同时极大降低了染料局部靠近而荧光淬灭的概率，因此Fluor555标记后的蛋白往往发出更强的荧光。但因为目前市面上使用的流式细胞仪大部分是传统流式细胞仪（非光谱流式细胞仪），激光器的适配度不是最佳，Fluor555染料更多是用在荧光成像领域。

图1: Fluor555及近似染料（Cy3，TRITC）对比

图2: 通过将等摩尔浓度的游离荧光素555（Fluor 555）和Cy3持续进行光照，每隔五秒采集一次数据点。荧光强度已被归一化至相同的初始强度。结果显示Fluor 555具有更优异的耐光漂白性能。

图3:不同染料与蛋白质结合比例下，Fluor555 和 Cy3 两种染料偶联山羊抗兔 IgG 抗体的相对荧光强度比较。显示Fluor555 具更高的相对荧光强度，结合摩尔比（DOL）高达8以上信号不衰减。

应用参考文献：

1. Arcangeli, A., et al. Method and kit for the prevention and/or the monitoring of chemo resistance of leukemia forms. PCT Int. Appl. WO 2011058509,2011.

2. Lundberg, E.,et al. A novel method for reproducible fluorescent labeling of small amounts of antibodies on solid phase. J. Immunol. Methods 2007, 322,40--49.