台盼蓝染色液：细胞活率怎么测？

在细胞培养、细胞传代和细胞计数实验中，除了关注细胞数量，还需要了解一个重要指标——细胞活率（Cell Viability）。

细胞悬液中有多少细胞仍然具有完整的细胞膜？有多少细胞已经失去膜完整性？在进行细胞接种、传代或后续实验之前，如何快速进行初步判断？台盼蓝染色法（Trypan Blue Exclusion Assay）就是一种经典、简便的细胞活率评估方法。

台盼蓝（Trypan Blue）是一种常用于细胞计数和活率评估的染料。它的基本原理是利用细胞膜完整性差异，观察细胞是否能够排斥染料。在常规台盼蓝排除法中：

因此，通过显微镜观察并分别计数未着色细胞与蓝色细胞，可以估算细胞悬液中的细胞活率。

需要注意，台盼蓝反映的是检测时细胞膜的完整性，而不是细胞所有生理功能是否正常。某些处于早期损伤或特殊状态的细胞，可能仍未被染成蓝色。因此，台盼蓝结果不能完全替代代谢活性、凋亡或其他细胞功能检测。

1. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）。

2. 细胞悬液加新鲜的台盼蓝染液，室温下染 3?5 min。

3. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察。

4. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。活细胞不着色并保持正常形态，有光泽。

5. 计数活细胞和死细胞数目。

6. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。

使用台盼蓝排除法进行人工计数时，常用计算公式为：

例如，在一次计数中：

• 未着色细胞：180 个
• 蓝色细胞：20 个

则：

细胞活率 = 180 ÷（180 + 20）× 100% = 90%

这里的数字仅用于演示计算方法。实际实验中，应依据规范的计数规则统计多个视野或计数区域，并根据需要设置重复，以提高结果的可靠性。

如果染色前对细胞悬液进行了稀释，还应在计算细胞浓度时考虑相应的稀释倍数；但稀释倍数不会直接改变上述活率公式。