锁住蛋白的秘诀：EnkiLife酸性抗体剥离液让洗膜如洗脸般简单

核心作用：Western Blot（WB）实验中，将膜上已结合的一抗、二抗洗脱下来，实现膜的重复利用，无需重新制胶、转膜，节省抗体、样本和时间，尤其适合珍贵样本 / 大分子量蛋白的二次检测。

适配场景：WB 膜的抗体脱除，可重新孵育其他靶点一抗，实现同一张膜检测多个蛋白。

一、分类

1. 碱性剥离液

· 特点：pH 12.0 左右（碱性），去除效率高，剥离快。

· 适用：常规化学发光（ECL）检测。

· 缺点：可能导致膜上的蛋白轻微脱落，适用于重复次数较少（2-3次）的实验。

2. 酸性剥离液

· 特点：pH 2.0 左右（酸性），作用温和，保护膜上蛋白不易脱落。

· 适用：蛋白丰度较低或需要反复检测的场景。

· 缺点：剥离速度相对慢。

二、酸性 vs 碱性

酸性剥离液 (推荐)--温和

• 保护蛋白：不会破坏二硫键，适合检测二硫键敏感的蛋白。
• 无毒无味：不含 β-ME，使用更安全舒适。
• 省时省力：无须加热，孵育时间短，操作像洗脸一样轻松。

强碱性剥离液--高效

• 剥离快：效率高，适用于高亲和力抗体。
• 风险：可能导致蛋白脱落，且有刺激性气味。
• 不推荐：对于多次重复检测，容易损伤膜上的目的蛋白。

三、为什么推荐酸性？

因为酸性剥离液通过温和的酸性环境破坏抗体与抗原之间的氢键，不破坏蛋白本身，实现“锁住”蛋白的同时，将膜清洗得干干净净，像洗脸一样简单。锁住蛋白的真相：我们要锁住的是蛋白的磷酸化或特定构象，而不是其硫键。

酸性配方优势：酸性剥离液（pH 2-3）利用酸性变性破坏抗体的构象，而蛋白本身在短时间内不易解聚。

由此，EnkiLife恩玑生命新推出的抗体剥离液(膜再生液，Cat#:RA10041)，采用温和型酸性洗涤配方，锁住蛋白，让洗膜如洗脸般简单！

产品特点

• 高效剥离：10min获得新膜；
• 低损耗：膜上蛋白几乎无损失；
• 无异味：不含β-巯基乙醇刺激性气味；
• 反复剥离：一张膜可剥离3次以上。

四、WB 抗体剥离标准流程

1. 适用膜类型

• PVDF 膜：需提前用甲醇活化，剥离后用甲醇重新润洗，蛋白保留最好（首选）；
• NC 膜（硝酸纤维素膜）：更易洗脱，但机械强度差，重复使用易破损，不推荐多次剥离。

2. 标准操作步骤（碱性剥离液，室温 / 37℃）

(1)剥离：将曝光完成的印迹膜浸泡到适量的抗体剥离液中（以完全浸没印迹膜为准），置于摇床室温孵育10min；

(2)清洗1：取出剥离好的印迹膜，用洗涤液（TBST或PBST）清洗3次，每次5-10min；

(3)检测剥离效果（可选）：将步骤2中的膜直接曝光显色检测，若信号仍存在，则重复步骤1和2，直至膜无信号；

(4)清洗2（可选）：取出步骤3中的印迹膜，用洗涤液（TBST或PBST）清洗3次，每次5-10min；

(5)封闭：将清洗后的膜重新封闭，进行新一轮的Western Blot免疫印迹实验。

剥离后的膜若暂不使用，可保存在4℃ TBST 中，24h 内使用最佳。

五、常见问题 & 解决方案（WB 剥离高频故障）

EnkiLIfe(恩玑生命)Western Blot实验全流程与产品解决方案：