多重免疫荧光mIHC试剂盒

一、什么是多重免疫荧光（mIHC）试剂盒？

由于mIHC实验流程复杂，涉及抗原修复、信号放大、荧光通道匹配、抗体剥离及背景控制等多个关键步骤，因此专业mIHC试剂盒通过整合优化的荧光染料体系、HRP检测试剂及配套缓冲体系，可有效提升实验重复性、降低荧光串扰和非特异背景，为高质量、多指标组织成像研究提供标准化支持。

TSA（Tyramide Signal Amplification，酪胺信号放大）试剂盒是一类基于HRP酶催化荧光酪胺分子沉积原理开发的高灵敏度免疫检测体系，其核心机制是利用HRP标记二抗催化活化荧光酪胺，使其在目标抗原周围发生共价沉积，从而实现局部高密度荧光富集，显著提高检测灵敏度，尤其适用于低表达抗原、FFPE组织样本以及弱信号蛋白检测。相比传统免疫荧光技术，TSA试剂盒不仅能够实现数十倍甚至更高的信号放大，还可在多轮染色过程中保留稳定荧光信号，因此支持同一组织切片上进行2-6重甚至更高通量的多指标检测，并有效降低同种属抗体交叉反应带来的限制。专业TSA试剂盒通常包含不同波长的荧光酪胺染料、HRP二抗、封闭液、抗原修复液、抗体剥离液及抗荧光淬灭封片剂等关键组分，可帮助研究人员降低背景噪声、减少荧光串色、提高实验重复性和组织信号稳定性，同时兼容自动化染色平台、光谱成像系统及数字病理分析软件，因此已成为肿瘤免疫微环境研究、PD-1/PD-L1免疫治疗评估、空间组学分析及精准病理研究中的核心工具。

二、多重免疫荧光mIHC试剂盒产品优势

1、高灵敏度检测

mIHC试剂盒基于TSA酶促信号放大技术，可显著增强目标蛋白荧光信号，即使是低丰度、弱表达或难检测抗原，也能够获得清晰稳定的成像结果，特别适用于FFPE组织样本及临床病理研究。

2、高通量多重检测能力

相比传统IHC或普通免疫荧光一次仅能检测1–2个指标，mIHC试剂盒可在同一张组织切片上实现2–7色甚至更高通量的Marker联合检测，同时分析多种免疫细胞、肿瘤标志物及功能蛋白，大幅提升组织信息获取效率。

3、兼容FFPE临床样本

专业mIHC试剂盒针对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织进行了优化，能够有效改善抗原修复效果和弱信号检测能力，因此广泛适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片、类器官等多种组织样本。

4、完整保留空间信息

mIHC技术不仅能够检测蛋白表达水平，更能够在组织原位保留细胞空间分布关系，实现肿瘤细胞与免疫细胞之间的空间定位分析，为空间病理学与空间生物学研究提供重要支持。

5、信号稳定、背景低

优化的TSA体系与缓冲体系可有效降低非特异背景、荧光串色及抗体交叉反应问题，提高实验重复性和数据一致性，同时具有优异的抗淬灭性能，适用于长时间扫描与数字病理分析。

6、支持自动化与数字病理分析

现代mIHC试剂盒通常兼容自动化染色平台、多光谱扫描系统及AI数字病理分析软件，可实现高通量、标准化实验流程，并支持单细胞分型、空间邻域分析及定量病理研究。

三、EnkiLife多重免疫荧光 mIHC 试剂盒产品

TSA全套试剂盒配套组分

四、试剂盒操作流程（以石蜡切片为例）

1. 脱蜡：将切片依次浸泡于二甲苯1（15min）、二甲苯2（15min）、无水乙醇1（5min）、无水乙醇2（5min）、 95%乙醇（5min）、 85%乙醇（5min）、 75%乙醇（5min），最后用水漂洗片子。

2. 抗原修复：抗原修复通常使用1×柠檬酸（PH6.0）作为修复液，高温高压修复，将切片

置于高压锅中，加入适量的修复液，关上高压锅，待上汽后计时 2min，冷却至室温，修复完毕。【如遇表达较弱的指标，则可用EDTA（PH9.0）作为修复液进行抗原修复。

如遇骨组织、脑组织等易掉片组织，则采用微波修复，修复温度控制在 80℃左右，修复液可用2×柠檬酸（PH6.0）。】

3. 内源性酶阻断：用纯水配制3%H2O2溶液，将切片放于溶液中，室温孵育20min。如遇易掉片组织，可适当降低H2O2浓度和孵育时间。

4. 封闭：在组织上滴加封闭液，37℃孵育30min。

5. 一抗孵育：使用抗体稀释液按照适宜浓度稀释一抗，在组织上滴加抗体，4℃过夜孵育，或者37℃孵育1h。

6. 二抗孵育：在组织上滴加HRP酶标记的二抗，37℃孵育1h。

7. 孵育TSA试剂：在组织上滴加TSA-XXX荧光染料，37℃孵育30min，再用PBST洗涤3次，每次5min。

8. 抗体洗脱：在组织上滴加抗体洗脱液，室温孵育15min（37℃孵育更佳）。

9. 重复4-8步骤（孵育其他TSA-XXX荧光染料）

10. DAPI染核：将DAPI工作液滴加到组织上，室温孵育5min，再用PBS洗涤3次，每次5min。将液体甩干，在组织上滴加抗荧光淬灭封片剂，盖上盖玻片，镜检拍照。

Enkilife专注于多重免疫荧光与空间生物学研究领域，可为科研用户提供完整的TSA-mIHC试剂体系、优化实验方案及专业技术支持服务，帮助研究人员快速建立稳定可靠的多重荧光检测平台，推动高质量科研成果与临床转化研究的实现。