免疫荧光VS多重免疫荧光
发表时间：2025-10-17??科研宝子们看过来！今天带大家了解「免疫荧光 IF」vs「多重免疫荧光 mIHC」
?收藏这篇推文，选对方法不踩坑！
??免疫荧光：
?基本原理：抗原-抗体特异性结合，利用荧光素（如FITC、Alexa Fluor）标记抗体，激发后发出荧光信号进行检测。
?信号放大机制：通常采用直接标记或间接二抗放大，信号强度有限。
?光谱处理：单一通道检测。
?优势：
?操作简便：单轮染色即可完成，实验周期短，流程易掌握。
?成本低廉：整体实验成本较低。
?技术门槛低：大多数实验室已配备常规荧光显微镜，常规实验室即可开展。
?适合快速验证：适用于初步验证，尤其适合早期探索性研究。
??劣势：
?检测通量：通常≤3种抗原，受限于抗体种属；荧光通道数量。
?重复验证耗时：若需研究多个标志物，需多次切片/多次实验，增加样本消耗与批次差异。
?缺乏空间维度信息：无法同时展示多种抗原的共定位或空间互作关系，难以解析复杂微环境。
??多重免疫荧光：
?基本原理：同样基于抗原-抗体结合，但通过多轮染色+信号放大（TSA），实现多个抗原在同一组织切片上的同时检测。
?信号放大机制：引入酪胺信号放大（TSA）：HRP催化荧光酪胺沉积，实现信号增强与稳定标记。
?光谱处理：多光谱成像。
?优势：
?检测通量：高，可同时检测多种抗原。
?信号放大：TSA（酪胺信号放大）使低丰度抗原可检，灵敏度提升10–100倍。
?一次实验可获取多维数据，实现多抗原空间共定位分析。
?适用于肿瘤免疫微环境分型，生物标志物共表达分析等前沿研究。
??劣势：
?流程复杂：需经历多轮实验，操作难度较大，耗时长。
?成本高昂：TSA染料、光谱成像系统等费用数倍于IF。
?技术门槛高：需优化抗体顺序、光谱解混参数，对人员和设备都有较高要求。
?光漂白：荧光信号减弱，重复扫描困难。
??一句话总结怎么选？
? 只想验证1-2个marker？IF足够！
? 想画“肿瘤免疫微环境地图”？直接冲mIHC！
?如果你有任何疑问，或者想要了解更多关于mIHC、IF的信息，欢迎在评论区留言哦！??