Western Blotting（蛋白质印迹）常用试剂配方|EnkiLife(恩玑生命)
发表时间：2025-12-12Western blot 或蛋白质免疫印迹是一种常规蛋白分析技术。抗体-抗原相互作用的特异性实现了复杂蛋白质混合物中的靶蛋白识别。在这里，您可以获取常用的裂解液配方、常用试剂制备方法、western blot 电泳相关试剂、封闭液与凝胶配方和转膜相关缓冲液的详细配方，帮助您顺利完成实验。除此之外，EnkiLife（恩玑生命）提供快速高效的全流程WB试剂盒，即开即用，免去复杂配液烦恼，打开文末链接即刻体验。
EnkiLife（恩玑生命）畅享版WB全流程试剂盒（RA10042）极致优化，将传统1-2天的Western Blot(WB)实验压缩至5小时,包含完整实验所需绝大部分试剂与耗材，用户仅需自备纯水、乙醇/甲醇、常用抗体及相关设备，且免费赠送HRP标记内参抗体、抗体剥离液，一站式解决实验需求。还有多种规格可供选择，预染蛋白Marker和PVDF膜可根据用户需求进行定制，满足特殊实验要求，提供个性化解决方案。
一、常用裂解液配方
1. 细胞骨架结合蛋白提取缓冲液--用于提取细胞骨架结合蛋白
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris, pH 7.4 |
10 mM |
|
NaCl |
100 mM |
|
EDTA |
1 mM |
|
EGTA |
1 mM |
|
NaF |
1 mM |
|
Na?P?O? |
20 mM |
|
Na?VO? |
2 mM |
|
Triton X-100 |
1% |
|
甘油 |
10% |
|
SDS |
0.1% |
|
脱氧胆酸钠 |
0.5% |
2. 可溶性蛋白缓冲液--用于提取可溶性蛋白
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris-HCl, pH 7.5 |
20 mM |
|
EGTA (Ca2?螯合剂) |
1 mM |
3. RIPA裂解液--适用于核膜破碎提取核蛋白
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris HCl, pH 8 |
50 mM |
|
NaCl |
150 mM |
|
NP-40 |
1% |
|
脱氧胆酸钠 |
0.5% |
|
SDS |
0.1% |
（Trips:含离子型去垢剂脱氧胆酸钠，适用于核膜破碎提取核蛋白。可能使激酶变性并破坏蛋白互作。）
4. NP-40裂解液--温和裂解液配方
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris HCl, pH 8 |
20 mM |
|
NaCl |
137 mM |
|
甘油 |
10% |
|
NP-40 |
1% |
|
EDTA |
2 mM |
二、常用试剂制备方法
1. 100 mM EDTA母液
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
EDTA |
1.86 g |
|
超纯水 |
40 ml |
|
NaOH |
调pH至7.4 |
|
定容 |
50 ml |
|
保存条件 |
4 ℃ |
2. 10×TBS浓缩液
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Trizma HCl |
24.23 g |
|
NaCl |
80.06 g |
|
pH调节 |
7.6 (HCl) |
|
定容 |
1L ddH?O |
3. TBST工作液（1L）--洗涤缓冲液
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
10×TBS |
100 ml |
|
超纯水 |
900 ml |
|
Tween20 |
1 ml |
4. 磷酸酶抑制剂母液--防止蛋白去磷酸化
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试剂名称 |
配置参数 |
|
原钒酸钠 |
100 mM |
|
溶剂 |
双蒸水 |
|
pH调节 |
9.0 (HCl) |
|
处理 |
煮至无色 |
|
保存条件 |
-20 ℃ |
（Trips:通风橱下完成，煮沸时加盖防蒸发，溶液变黄则废弃，常见使用浓度范围为 1-10 mM。）
5. 温和剥离缓冲液（1L）--膜再生缓冲液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
甘氨酸 |
15 g |
|
SDS |
1 g |
|
Tween20 |
10 ml |
|
pH |
2.2 |
|
溶剂 |
超纯水定容至1 L |
6. 强效剥离缓冲液（100ml）
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试剂名称 |
配置参数 |
|
10% SDS |
20 ml |
|
0.5M Tris HCl pH 6.8 |
12.5 ml |
|
超纯水 |
67.5 ml |
|
β-巯基乙醇 |
0.8 ml |
（Trips:需通风橱内操作。）
7. 抗体稀释液--用于稀释一抗或二抗
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试剂名称 |
配置参数 |
|
正常血清 |
100 μl |
|
BSA |
10 mg |
|
TBS |
900 μl |
8. 碳酸盐包被缓冲液（100 mM, pH 9.6）--用于ELISA实验的包被缓冲液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Na?CO? |
3.03 g |
|
NaHCO? |
6.0 g |
|
溶剂 |
超纯水定容至1L |
9. PBS（pH 7.4, 500ml）
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Na?HPO? |
1.16 g |
|
KCl |
0.1 g |
|
KH?PO? |
0.1 g |
|
NaCl |
4 g |
10. 1 M Tris-HCl，pH 7.6
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris base |
12.11 g |
|
ddH2O |
80 mL |
|
pH调节 |
7.6 (HCl) |
|
定容 |
100 mL ddH2O |
11. 0.5 M Tris-HCl，pH 6.8
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris base |
6.06 g |
|
ddH2O |
60 mL |
|
pH调节 |
6.8 (HCl) |
|
定容 |
100 mL ddH2O |
12. 10% SDS
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
SDS |
1 g |
|
ddH2O |
10 mL |
13. 1%溴酚蓝--电泳指示剂
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试剂名称 |
配置参数 |
|
溴酚蓝 |
100 mg |
|
ddH2O |
10 mL |
三、电泳相关试剂
1. SDS上样缓冲液（2X）--用于SDS-PAGE上样
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试剂名称 |
配置参数 |
|
0.5 M Tris-HCl，pH 6.8 |
2.5 ml |
|
甘油 |
2 ml |
|
10%SDS |
4 ml |
|
0.1%溴酚蓝 |
0.5 ml |
|
ddH2O |
定容至10 mL |
2. LDS上样缓冲液（4X）--用于LDS-PAGE上样
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris HCl |
0.666 g |
|
Tris base |
0.682 g |
|
LDS |
0.8 g |
|
EDTA |
0.006 g |
|
甘油 |
4 g |
|
SERVA Blue G250（1%溶液） |
0.75 ml |
|
酚红（1%溶液） |
0.25 ml |
|
ddH2O |
定容至10 ml |
3. Tris-甘氨酸SDS电泳缓冲液（10X）--SDS-PAGE电泳缓冲液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris base |
29 g |
|
甘氨酸 |
144 g |
|
SDS |
10 g |
|
ddH2O |
定容至1000 ml |
4. Tris-甘氨酸非变性电泳缓冲液（10X）--非变性PAGE电泳缓冲液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris base |
29 g |
|
甘氨酸 |
144 g |
|
ddH2O |
定容至1000 ml |
5. MOPS SDS电泳缓冲液（20X）--MOPS缓冲系统电泳液
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
MOPS |
104.6 g |
|
Tris base |
60.6 g |
|
SDS |
10 g |
|
EDTA |
3 g |
|
ddH2O |
定容至500 ml |
6. MES SDS电泳缓冲液（20X）--MES缓冲系统电泳液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
MES |
97.6 g |
|
Tris base |
60.6 g |
|
SDS |
10 g |
|
EDTA |
3 g |
|
ddH2O |
定容至500 ml |
7. Tricine SDS电泳缓冲液（10X）--Tricine缓冲系统电泳液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Tricine |
179 g |
|
Tris base |
121 g |
|
SDS |
10 g |
|
ddH2O |
定容至1000 ml |
四、封闭液与凝胶配方
1. 5%脱脂奶粉封闭液--Western Blot封闭液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
脱脂奶粉 |
2.5 g |
|
TBST或PBST |
定容至50 ml |
2. 3%BSA封闭液--Western Blot封闭液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
BSA |
1.5 g |
|
TBST或PBST |
定容至50 ml |
3. 分离胶配方
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
溶液 |
6%/10%/12%/16%/20% |
|
50%丙烯酰胺/Bis |
3/5/6/8/10 ml |
|
分离胶缓冲液 |
9.4 ml |
|
10%SDS |
250 ul |
|
50%蔗糖 |
4 ml |
|
ddH2O |
7.8/5.8/4.8/2.7/0.75 ml |
|
TEMED |
6.25 ul |
|
APS |
625 ul |
（Trips:TEMED、APS最后加入，并在倒胶之前充分混匀。）
4. 50%丙烯酰胺/Bis--凝胶储存液
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
丙烯酰胺 |
48.3 g |
|
Bis |
1.7 g |
|
ddH2O |
定容至100 ml |
5. 分离胶缓冲液
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris |
30.3 g |
|
HCl |
调pH至8.8 |
|
ddH2O |
定容至250 ml |
6. 过硫酸铵（APS）（现配）--凝胶聚合引发剂
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试剂名称 |
配置参数 |
|
过硫酸铵 |
100 mg |
|
ddH2O |
定容至2 ml |
7. 4%浓缩胶--SDS-PAGE浓缩胶
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试剂名称 |
配置参数 |
|
50%丙烯酰胺/Bis |
1 ml |
|
浓缩胶缓冲液 |
4.2 ml |
|
10%SDS |
125 ul |
|
ddH2O |
6.3 ml |
|
TEMED |
5 ul |
|
APS |
1 ml |
（Trips:TEMED、APS最后加入，并在倒胶之前充分混匀。）
8. 浓缩胶缓冲液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris |
11.4 g |
|
HCl |
调pH至6.8 |
|
ddH2O |
至250 ml |
五、转膜相关缓冲液
1. Tris-甘氨酸转膜缓冲液（25X）--Western转膜缓冲液
|
试剂名称 |
配置参数 |
|
Tris base |
18.2 g |
|
甘氨酸 |
90 g |
|
ddH2O |
定容至500 ml |
2.Bis-Tis转膜缓冲液（20X）--Bis-Tris系统转膜缓冲液
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试剂名称 |
配置参数 |
|
Bicine |
10.2 g |
|
Bis-Tris（游离碱） |
13.1 g |
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EDTA |
0.75 g |
|
ddH2O |
定容至125 ml |
EnkiLife（恩玑生命） Western Blot产品推荐：
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EnkiLife（恩玑生命）产品货号 |
EnkiLife（恩玑生命）产品名称 |
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RA10020 |
2h极速WB即用型全流程试剂盒 |
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RA10021 |
4h快速WB即用型全流程试剂盒 |
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RA10042 |
畅享版WB全流程试剂盒 |
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G0142012 |
Bis-Tris, 4-20%, 12wells |
|
G0142015 |
Bis-Tris, 4-20%, 15wells |
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RA10043 |
即凝广谱梯度制胶试剂盒 |
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RC0160 |
RIPA裂解液（强） |
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RC0005 |
大分子蛋白专用细胞/组织裂解液 |
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RA10055 |
5×上样缓冲液 |
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RA10037 |
校准级彩色预染蛋白Marker（8-180kDa） |
|
RA10038 |
校准级彩色预染蛋白Marker（10-250kDa） |
|
RA10039 |
校准级高分子彩色预染蛋白Marker（25-400kDa） |
|
RA10044 |
20×通用型快速电泳液 |
|
RA10051 |
20×免冰浴快速转膜液 |
|
RA022 |
PVDF膜（0.22μm） |
|
RA045 |
PVDF膜（0.45μm） |
|
RA10052 |
5×无蛋白快速封闭稀释液 |
|
RA10058 |
5min无蛋白快速封闭液 |
|
RA10059 |
1min无蛋白快速封闭液 |
|
RA10056 |
免封闭快速抗体稀释液 |
|
RA10060 |
F1免封闭超快抗体稀释液 |
|
RA10001 |
超敏ECL化学发光液 |
|
RA10041 |
抗体剥离液 |
|
RA10057 |
考马斯亮蓝快速染色液(免脱色) |
|
RA10061 |
10×TBST |