Western Blot 实验中的“导航仪”：校准级彩色预染蛋白Marker
发表时间：2025-12-23一、组成与原理
预染 Marker 由不同分子量的蛋白组成，这些蛋白与染料通过共价键结合，常用的染料有丽春红、溴酚蓝等。在电泳过程中，预染 Marker 中的蛋白会根据其分子量大小在凝胶中迁移，由于蛋白与染料结合，所以可以直接看到条带的迁移情况，从而监测电泳进程。它的核心作用只有一句话：“在电泳、转膜、杂交全过程里，让你肉眼就能看见条带跑到哪儿了。”
二、校准级蛋白Marker的必要性
经常跑WB的科研佬们会不会觉得跑蛋白胶都像开盲盒——分子量反复横跳，条带位置玄学浮动…纠结半天的糖基化修饰、多聚体、蛋白剪切，最后发现——居然是预染Marker在搞事情！（真的会谢！）
偷偷说个业内真相：很多预染Marker只是“可见但不准”…
但！EnkiLife（恩玑生命）的预染蛋白Marker不一样！直接用非预染Marker的标准来做预染，让标准，更标准！分子量稳定性全面领先，条带精准度堪比数学公式！
? 分子量稳如泰山，条带清晰不模糊
? 缓冲体系/高温环境全适配，坚决不“摆烂”
? 精准度对标非预染，结果重复性拉满！
EnkiLife（恩玑生命）重新定义预染Marker标准：
ü 校准级彩色预染蛋白Marker（8-180kDa）：RA10037
ü 校准级彩色预染蛋白Marker（10-250kDa）：RA10038
ü 校准级高分子彩色预染蛋白Marker（25-400kDa）：RA10039
EnkiLife（恩玑生命）预染Marker与国际主流品牌对比验证图：
关键分子量节点偏差以26614（非预染Marker）为参考：预染蛋白Marker（8-180kDa）：RA10037和预染蛋白Marker（10-250kDa）：RA10038的准确度均显著优于国际品牌，72kDa处偏差较大，其他条带等同或优于国际品牌。
三、为何要分为预染蛋白 Marker和非预染蛋白 Marker ？
在Western Blot (WB) 实验中，预染蛋白 Marker (Prestained Protein Ladder)和非预染蛋白 Marker (Unstained Protein Ladder)是两种最常用的分子量标准。它们的核心区别在于：是否在电泳过程中直接可见。简单来说，预染 Marker 是为了让你“看得到”，而非预染 Marker 是为了让你“测得准”。
（一）核心对比：直观VS精准
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特性 |
预染蛋白Marker |
非预染蛋白Marker |
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原理 |
蛋白质已与染料（如考马斯亮蓝）共价偶联 |
纯化的天然蛋白混合物，未结合染料 |
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核心特征 |
蛋白条带共价结合有色染料，电泳/转膜全程可见 |
蛋白条带无染料标记，需染色后才能观察 |
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电泳阶段 |
电泳过程中可直接观察条带迁移位置，实时监控电泳进度 |
电泳过程不可见，无法实时监控 |
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转膜验证 |
转膜后可直接在膜上看到条带，快速判断转膜是否成功、膜的正反面 |
转膜后不可见，需通过后续染色（如丽春红、考马斯亮蓝）确认转膜效果 |
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分子量准确性 |
染料可能影响蛋白电泳迁移率，分子量判定近似值 |
无染料干扰，分子量判定精准，是分子量校准的金标准 |
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适用场景 |
电泳进程监控、转膜效率验证、WB实验快速质控 |
靶蛋白精确分子量测定、科研数据发表的定量分析 |
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染色方式 |
无需额外染色，肉眼/成像仪直接识别 |
需用考马斯亮蓝、银染等方法染色后观察 |
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保存条件 |
通常需- 20℃冻存，避免反复冻融导致条带弥散 |
稳定性较好，-20℃长期保存即可 |
（二）典型应用场景
1. 预染 Marker--“看得见的路标”
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电泳实时监控：电泳过程中可通过电泳槽玻璃观察条带位置，避免电泳过度（条带跑出胶外）或不足（条带未分离）。
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转膜效率快速验证：转膜完成后，直接在 PVDF/NC 膜上观察预染条带的分布，判断转膜方向是否正确、蛋白是否有效转移（如胶上残留条带过多则说明转膜不充分）。
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WB 实验质控：在免疫印迹显色后，可直接将靶条带与膜上的预染 Marker 条带比对，快速估算靶蛋白分子量。
2.非预染 Marker 的核心用途--“金标准”
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精确分子量测定：在科研论文发表或需要精准判定蛋白分子量时，非预染 Marker 是首选。电泳结束后将 Marker 条带切下染色，通过条带迁移距离与分子量对数的标准曲线，计算靶蛋白的精确分子量。
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高分辨率电泳实验：如双向电泳、蛋白纯度鉴定等对分子量精度要求高的实验，需用非预染 Marker 作为参照。
四、注意事项
1. 预染 Marker--“看得见的路标”
- 电泳实时监控：电泳过程中可通过电泳槽玻璃观察条带位置，避免电泳过度（条带跑出胶外）或不足（条带未分离）。
- 转膜效率快速验证：转膜完成后，直接在 PVDF/NC 膜上观察预染条带的分布，判断转膜方向是否正确、蛋白是否有效转移（如胶上残留条带过多则说明转膜不充分）。
- WB 实验质控：在免疫印迹显色后，可直接将靶条带与膜上的预染 Marker 条带比对，快速估算靶蛋白分子量。
1. 表观分子量会“漂移”：不同胶浓度（8 % vs 12 %）、Tris-Glycine vs Bis-Tris、MOPS vs MES，都会让同一条带上下移动 2–5 kDa；说明书给的值是“典型值”，不是绝对值。
2. 染料会轻微影响蛋白等电点，不能用于 Native-PAGE、等电聚焦。
3. 避免加热煮沸：部分预染 Marker 已预混 loading buffer，加热可能会破坏其结构，影响使用效果。
4. 避免反复冻融：染料-蛋白偶联键长期冻融会断裂，出现“拖尾”或失色；分装后 ?20 ℃ 避光保存。
5. 确定合适的上样量：根据凝胶厚度和实验要求，按照说明书推荐的上样量进行操作，可适当调整。
6. 注意转膜条件：转印分子量较大的蛋白时，可能需要适当延长转印时间或提高电流 / 电压，以提高转印效果。
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