人胃癌细胞(未分化)HGC-27

人胃癌细胞系HGC-27是一种未分化的人胃癌细胞系，常用于研究胃癌的生物学特性及其相关机制。以下是关于HGC-27细胞系的一些关键信息：

 

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1. 细胞来源与特性：HGC-27细胞源自未分化胃癌组织，具有上皮形态和贴壁生长特性，能够分泌粘液素。这些细胞表现出较强的肿瘤发生性，并且在某些研究中被用作胃癌干细胞（CSCs）的研究对象[9,13,14]。

2. 培养条件：HGC-27细胞通常在RPMI-1640培养基中培养，添加10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素-抗真菌剂（P/S），在37°C、5% CO2的恒温箱中培养。传代比例一般为1:2至1:5，每2至3天更换一次培养基。

3. 冻存与复苏：HGC-27细胞可以通过含有DMSO的冻存液进行冻存，冻存条件为液氮蒸汽相中。复苏时需将冻存液在37°C水浴中融化，并按照操作指南进行复苏。

4. 研究应用：HGC-27细胞广泛用于研究胃癌的增殖、迁移、侵袭等生物学行为。例如，研究表明，miRNA抑制剂可以有效抑制HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力[2]。此外，HGC-27细胞还被用于研究药物对胃癌细胞的影响，如胡椒碱通过下调Wnt/β-catenin信号分子表达调控HGC-27细胞的增殖及侵袭[10]。

 

 

 

5.安全性与使用限制：HGC-27细胞系仅供科研使用，不可用于临床治疗。在生产和培养过程中，需严格控制无菌条件，    并根据实际情况决定是否添加抗生素。

6.特殊特性：HGC-27细胞表现出较强的干细胞特性，能够形成肿瘤球体，并通过外泌体介导与其他细胞的通讯[9,13,14]。此外，HGC-27细胞在某些实验中显示出较高的移植率和低转移率[11]。

HGC-27细胞系是一种重要的工具，用于研究胃癌的生物学特性及其潜在的治疗靶点。在使用过程中，需遵循严格的无菌操作和冻存复苏步骤，以确保实验结果的可靠性和重复性。

HGC-27细胞系在胃癌研究中的具体应用案例包括以下几个方面：

1. 迁移和侵袭能力研究：

· HGC-27细胞系被用于评估胃癌细胞的迁移和侵袭能力。通过Transwell迁移和侵袭实验，研究者能够检测HGC-27细胞的迁移和侵袭能力，并进一步分析与CD44相关的蛋白质表达[19]。

· 另一项研究中，HGC-27细胞被用于评估不同条件下细胞的迁移和侵袭能力，包括使用5-Aza-CdR和TSA处理后的细胞[20]。

2.miRNA表达和功能研究：

· HGC-27细胞系被用于研究miRNA在胃癌中的作用。例如，研究发现miR-433和miR-127在HGC-27细胞中的表达水平显著降低，且这些miRNA能够有效抑制肿瘤细胞的增殖和细胞周期[20]。

· 另一项研究中，HGC-27细胞被用于评估miRNA模拟物和负对照miRNA的转染效果，并通过RT-PCR分析mRNA表达[20]。

3.药物耐药性研究：

· HGC-27细胞系被用于研究胃癌细胞的药物耐药性。例如，研究发现HCCR蛋白在HGC-27细胞中的高表达与5-FU耐药性相关，且在耐药亚系HGC-27-R中HCCR表达显著上调[21]。

4.代谢研究：

· HGC-27细胞系被用于研究胃癌细胞的代谢特性。例如，通过葡萄糖消耗和乳酸产生检测、氧消耗率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）测定等方法，研究者能够评估HGC-27细胞的代谢状态[22]。

5.肿瘤抑制研究：

· HGC-27细胞系被用于评估不同治疗策略对肿瘤生长的影响。例如，研究发现GQDs/Cy5-miR@sEVs能够有效抑制HGC-27细胞的肿瘤生长，并通过靶向miR-193a-3p的靶标基因CCND1来实现这一效果[23]。

6.药物抑制作用研究：

· HGC-27细胞系被用于评估姜黄素类似物CH-5对胃癌细胞的抑制作用。研究发现CH-5能够有效抑制HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力，表明其可能成为治疗胃癌的一种潜在药物[24]。

HGC-27细胞系的干细胞特性是如何被鉴定和验证的？

HGC-27细胞系的干细胞特性主要通过以下几种实验方法进行鉴定和验证：

1. 菌落形成测定：在对数生长期，HGC-27细胞被消化成单细胞悬浮液，然后添加到6厘米直径的培养皿中，每个皿中含1×10^3个细胞。经过14天的培养后，收集上清液，洗涤并固定菌落，最后用Giemsa染色，通过光学显微镜计数菌落数量，计算菌落形成效率。菌落形成是干细胞的一个重要特征，因为干细胞具有自我更新和分化的能力，能够形成多细胞集落[7]。

2. 细胞周期分析：使用Cell Cycle和Apoptosis分析试剂盒，对对数生长期的转染HGC-27细胞进行收集和洗涤，然后在暗处加入Proline iodide缓冲液，37°C下孵育30分钟后立即进行流式细胞术分析。通过分析细胞周期分布，可以评估细胞的增殖能力和干细胞特性[7]。

3. 萤光素酶报告基因实验：根据TargetScanHuman 7.0预测，SOX4可能是miR-140的潜在靶标。使用QuikChange Multi Site-Directed Mutagenesis Kit合成SOX4的野生型和突变型3'UTR片段，分别克隆到萤光素酶报告基因载体中，与miR-140模拟物或对照物一起转染。48小时后，通过流式细胞术检测荧光强度。这种实验可以验证SOX4在HGC-27细胞中的表达情况及其与miR-140的关系，从而间接反映干细胞特性[7]。

4. 实时定量PCR（qPCR） ：通过RNAiso或TRIzol试剂提取总RNA和miRNA，然后反转录成互补DNA（cDNAs）。使用特定的引物进行qPCR，以miR-140和其他测试基因为目标，U6和GAPDH作为内参基因。实验重复三次，数据采用2^-DDCt方法分析。qPCR实验可以定量分析特定基因的表达水平，从而评估干细胞相关基因的表达情况[7]。

5. Western blot实验：细胞裂解后提取蛋白质，通过SDS-PAGE分离，转移到PVDF膜上，用特定的抗体进行免疫印迹分析。Western blot实验可以检测特定蛋白的表达水平，进一步验证干细胞相关蛋白的表达情况。

 

miRNA抑制剂如何具体影响HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力？

miRNA抑制剂对HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力有显著影响。具体来说：

1. 增殖：

· miR-191和miR-425的抑制显著降低了HGC-27细胞的增殖能力。通过CCK-8实验，发现miR-191和miR-425抑制剂处理后的HGC-27细胞增殖明显减少[2]。

· miR-217的抑制也显著促进了HGC-27细胞的增殖[25]。

2.迁移：

· miR-191和miR-425的抑制显著减少了HGC-27细胞的迁移能力。在人工伤口愈合实验中，抑制这两种miRNA后，细胞迁移显著减少[2]。

· miR-217的抑制同样减少了HGC-27细胞的迁移能力[25]。

3.侵袭：

· miR-191和miR-425的抑制显著降低了HGC-27细胞的侵袭能力。通过Transwell侵袭实验，发现抑制这两种miRNA后，细胞侵袭显著减少[2]。

· miR-217的抑制也显著减少了HGC-27细胞的侵袭能力[25]。

miRNA抑制剂通过不同的机制影响HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR-191和miR-425的抑制主要表现为减少细胞增殖和迁移，而增加细胞周期S期的比例[2]。miR-217的抑制则表现为促进细胞增殖和减少细胞迁移及侵袭[25]。

胡椒碱通过Wnt/β-catenin信号分子调控HGC-27细胞增殖及侵袭的具体机制是什么？

胡椒碱通过Wnt/β-catenin信号分子调控胃癌细胞HGC-27增殖及侵袭的具体机制如下：

1. 细胞增殖和活力：

2.  小剂量胡椒碱（5 μmol·L^-1）对HGC-27细胞的增殖和活力有显著影响。研究表明，5 μmol·L^-1的胡椒碱在12、24、48小时后能显著降低HGC-27细胞的增殖率和活力，但没有明显的细胞毒性[10]。这表明胡椒碱通过抑制Wnt/β-catenin信号通路，从而抑制了HGC-27细胞的增殖。

3. 细胞迁移和侵袭能力：

4.  划痕试验和Transwell小室试验结果显示，5 μmol·L^-1的胡椒碱可以显著降低HGC-27细胞的迁移能力和侵袭能力[10]。这些结果表明，Wnt/β-catenin信号通路的抑制可以有效减少细胞的迁移和侵袭行为。

5. Wnt/β-catenin信号分子表达：

6.  胡椒碱显著下调了Wnt/β-catenin信号分子的表达，包括β-catenin、MMP2、MMP9和N-cadherin [10]。RT-qPCR和Western blot的结果均显示，这些关键蛋白的mRNA和蛋白水平在实验组中显著低于正常组和对照组（Wnt/β-catenin抑制剂组），进一步验证了胡椒碱通过下调Wnt/β-catenin信号分子来调控细胞行为[10]。

7. 机制总结：

8.  总结来说，小剂量胡椒碱通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达，显著抑制了胃癌细胞HGC-27的增殖、迁移和侵袭能力。这一机制可能是胡椒碱抗肿瘤作用的重要途径之一[10]。

参考文献：

1. Correction to: DNA methylation downregulated mir-10b acts as a tumor suppressor in gastric cancer. [PMID: 36136226]

2. Role of miR-191/425 Cluster in Tumorigenesis and Diagnosis of Gastric Cancer. [PMID: 24603541]

3. Ginsenoside Rh4 Suppresses Metastasis of Gastric Cancer via SIX1-Dependent TGF-β/Smad2/3 Signaling Pathway. [PMID: 35458126]

4. Garcinol acts as an antineoplastic agent in human gastric cancer by inhibiting the PI3K/AKT signaling pathway.[PMID: 32565991]

5. Inhibition of Nrf2/HO-1 signaling pathway by Dextran Sulfate suppresses angiogenesis of Gastric Cancer. [PMID: 33442403]

6. Identification of aberrantly expressed glycans in gastric cancer by integrated lectin microarray and mass spectrometric analyses.[ PMID: 27895315]

7. MicroRNA-140 Inhibits Cell Proliferation in Gastric Cancer Cell Line HGC-27 by Suppressing SOX4. [ PMID: 27353653]

8. Effect of TBL-12 on Proliferation, Migration, Invasion, and Apoptosis of Gastric Cancer Cell HGC-27. Kai Zhou et al.

9. LncRNA H19-rich extracellular vesicles derived from gastric cancer stem cells facilitate tumorigenicity and metastasis via mediating intratumor communication network. [ PMID: 37005676]

10. PDF基于Wnt/β-catenin信号对胡椒碱抗肿瘤作用机制的研究. 郭丽等.[2018-12-31]

11. High Engraftment and Metastatic Rates in Orthotopic Xenograft Models of Gastric Cancer via Direct Implantation of Tumor Cell Suspensions. [PMID: 38398149]

12. Bone marrow-derived stromal cells are associated with gastric cancer progression.Br J Cancer 2015 Jul 28;113(3):443-52. [PMID: 26125445]

13. Methylated lncRNAs suppress apoptosis of gastric cancer stem cells via the lncRNA-miRNA/protein axis. [PMID: 38600465]

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18. 灵芝真菌免疫调节蛋白在体外对不同胃癌细胞的抑制作用. 许燕等.[2016-05-24]

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